根據(jù)流動相和固定相相對極性不同,液相色譜分為正相色譜和反相色譜。流動相極性大于固定相極性的情況,稱為反相色譜。非極性鍵合相色譜可作反相色譜。在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用廣泛,現(xiàn)代液相色譜分析工作的70%以上是在非極性鍵合固定相上進行的。
指利用非極性的反相介質(zhì)為固定相,極性有機溶劑的水溶液為流動相,根據(jù)溶質(zhì)極性(疏水性)的差別進行溶質(zhì)分離與純化的洗脫色譜法。與HIC一樣,RPC中溶質(zhì)也通過疏水性相互作用分配于固定相表面,但是,RPC固定相表面被非極性基團所覆蓋,表現(xiàn)出強烈的疏水性。
RPC固定相大多是硅膠表面鍵合疏水基團,基于樣品中的不同組分和疏水基團之間疏水作用的不同而分離。在生物大分子分離中,多采用離子強度較低的酸性水溶液,添加一定量乙腈、異丙醇或甲醇等與水互溶的有機溶劑作為流動相。
反相介質(zhì)性能穩(wěn)定。分離效率高,可分離蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、核酸、甾類、脂類、脂肪酸、糖類、植物堿等含有非極性基團的各種物質(zhì)。